EB替代品及其优缺点

下面是小编为大家整理的EB替代品及其优缺点,供大家参考。

　1.GeneFinder 核酸染料 GeneFinder 是新型核酸染料，具有平安、灵敏等突出优点，可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。与强致癌性的 EB 不同，GeneFinder 毒性很低，使用平安，可有效爱护试验操作者和环境。GeneFinder 与 dsDNA 结合荧光信号可增加 800—1000 倍，其检测核酸的灵敏度比 EB 染色法平均高 10 倍左右，与 SYBRGreenI 染料的灵敏度相当。此外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要实行适当的爱护措施。

　1.1.GeneFinder 的特点：

　1. 平安性：GeneFinder 核酸染料致突变性远低于 EB 数倍甚至数十倍 2. 灵敏度：检测核酸的灵敏度平均高于 EB 染色法 10 倍左右 3. 操作简洁：本染料有多种使用方法，操作简洁 4. 适用范围：适用于多种核酸电泳分析，可以对 DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色 5. 兼容性：对常用酶（如 Taq 酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等）没有抑制作用 2.Goldview 核酸染料 GoldenView 是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采纳琼脂糖电泳检测 DNA 时，GoldenView 与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与 EB 相当，使用方法与之完全相同。在 100ml 琼脂糖胶溶液中加入 5-10µlGoldenView 即可。在紫外透射光下双链DNA 呈现绿色荧光，也可用于染 RNA。无致突变性；而溴化乙锭 EB 是一种强致癌剂，选用 GoldenView 代替 EB 比较明智和平安。目前尚未发觉 Geneview 有致癌性，但是在使用中发觉它有肯定的刺激性，在使用过程中应戴上手套。Goldview 对于大片段 DNA 的染色效果还行，但是对于 500bp 以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下特别简洁淬灭，一般 5-10min 条带就会消逝。所以应当抓紧时间拍照后再观看。此外 Goldview 不适用于胶回收。灵敏度差，本底色严峻，不利于回收，不稳定。毒性很大，尤其在紫外灯下其诱导突变力量极高。

　2.1.Goldview 核酸染料的特点：

　1.平安性：未发觉 GoldView 有致癌作用 2.灵敏度：灵敏度与 EB 相当，将有可能渐渐取代 EB 而得以广泛应用 3.适用范围：用于琼脂糖电泳检测 DNA 或 RNA 的染色 3.SYBERgreenI 核酸染料 SYBERgreenI 是一种经济的核酸染料，它与双链 DNA(dsDNA)结合后，荧光大大增加，检测灵敏度高于 EB。但稳定性较差(怕光、怕水、怕热)，使得染色的重复性较低。它对于<50bpDNA片段染色力量的缺失及其对<l00bpDNA片段的低灵敏度是其常规使用的最大

　障碍。这种致畸性低而相对平安得多的核酸染料在标准 300nm 的紫外透射光下，能检测低至 60pg 的 dsDNA，比 EB 至少高了一个数量级。同时，SYBRGreenI 染料-DNA 复合物的荧光量子产率约为 0.8，相当于 EB 的 5 倍。SYBRGreenI 的使用和 EB 同样简洁，而具有比 EB 更高的灵敏度，致变性也低得多，甚至几乎没有毒性。SYBRGreenI 是高灵敏的 DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简洁，无须脱色或冲洗；至少可检出 20pgDNA，高于 EB 染色法 25～100 倍。SYBRGreenI 与 dsDNA 结合荧光信号会增加 800～1000 倍，用 SYBRGreenI 染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适用于多种电泳分析。SYBRGreenI 与双链 DNA 的亲和力特别高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4 连接酶等）没有抑制作用；此外，SYBRGreenI与 EB 相比，诱变力量大大降低。SYBRGreenI 是高灵敏度且不具有强致突变性的核酸染料，但由于其昂扬的价格限制了它的广泛使用。

　3.1.SYBRGreenI 核酸染料特点：

　1.灵敏度：至少可检出 20pgDNA，高于 EB 染色法 25～100 倍 2.信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低 3.操作简洁：无须脱色或冲洗 4.适用范围：可适用于多种电泳分析 5.便利性：不影响其它修饰酶作用 6.经济性：价格比银染廉价 4.GelRed 和 GelGreen 核酸染料 GelRed 和 GelGreen 是集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂较好，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。GelRed 染色后具有较低的背景荧光信号。GelRed 和 GelGreen 无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了极高的灵敏度。GelRed 在预制凝胶中使用时仍旧有极高的灵敏度，GelRed在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度，尤其对小分子量的 DNA 检测特别灵敏。GelGreen可以满意使用488nm激光凝胶扫描仪或者可见光激发的DarkReader的讨论人员的使用。GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBRGreenI灵敏度相当，但不存在后者的不稳定性问题。GelRed 和 GelGreen 特殊是 GelRed 特别稳定，可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采纳常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBRGreenI 提高了平安性。GelGreen 没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。

　4.1.GelRed 和 GelGreen 核酸染料特点：

　1.平安性：无毒，诱变性远远小于 EB。

　2.灵敏度：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于 SYBRGreenI。

　3.稳定性：适用于加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。

　4.信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

　5.操作简洁：与 EB 一样，可直接用紫外凝胶透射仪观看。

　6.适用范围：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或 聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA 或 ssDNA 或 RNA 染色。

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